homeremediesforeverything.org
KEY: ภาพรวมในวันนี้ ลดลงจากเมื่อวานนี้ผ่านมา แนวโน้มยังคงทรงตัว PCR +27, 560 ราย ส่วน ATK +16, 079 ราย รวมทั้งสองส่วนอยู่ที่ 43, 639 ราย สำหรับยอดการพบผู้ป่วยโควิด-19 รายใหม่ จากการตรวจด้วย PCR ทำสถิติสูงที่สุดนับตั้งแต่มีการระบาด ผู้ป่วยอาการหนัก-ใช้ท่อช่วยหายใจเพิ่มสูงขึ้น อัตราการเสียชีวิตยังอยู่ที่ระดับ 80 กว่าราย … ศูนย์ข้อมูลโควิด-19 รายงานสถานการณ์การระบาดของโควิด-19 ในประเทศไทยประจำวันนี้ ( 31 มี. ค.
5-10 มิลลิโมลาร์ เอนไซม์ เนื่องจากขั้นตอนในการสังเคราะห์ดีเอ็นเอโดยเทคนิค PCR ต้องมีการทำให้ดีเอ็นเอเสียสภาพด้วยความร้อน เอนไซม์ดีเอ็นเอพอลิเมอเรสที่ใช้ จึงเลือกใช้เอนไซม์ทนความร้อน (thermostable DNA polymerase) เอนไซม์ชนิดแรกแยกได้จากแบคทีเรีย Thermus aquaticus VT1 ทำงานได้ดีที่อุณหภูมิ 70-80 องศาเซลเซียส มีกิจกรรมที่สูงสุดได้ที่ pH 7. 3-8. 3 ชนิดที่ 2 แยกได้จากแบคที่เรียเดียวกันเป็นชนิดที่มีการใช้กันมาก รู้จักกันในชื่อ Tag polymerase ทำงานได้ดีที่อุณหภูมิ 70-80 องศาเซลเซียสสำหรับเอนไซม์ Tag polymerase มักอยู่ในสารละลายที่มีความเข้มข้น 5 ยูนิตต่อไมโครลิตร และใช้ในปฏิกิริยา 2. 5-5 ยูนิตต่อปฏิกิริยา 100 ไมโครลิตร ต่อมาสามารถแยกเอนไซม์ได้อีกหลายชนิดจากแบคทีเรียต่างๆโดยทุกชนิดที่แยกได้ประกอบด้วยพอลิเปปไทด์เดียว (Monomer) ขนาดอยู่ระหว่าง 61-100 กิโลดาลตัน ความแตกต่างของเอนไซม์แต่ละชนิดคือ การมีคุณสมบัตรตัดดีเอ็นเอจากปลาย (exonuclease activity) เพราะเอนไซม์ที่สามารถตัดดีเอ็นเอจากปลาย 3' (3' ไป 5' exonuclease) จะสามารถกำจัดนิวคลีโอไทด์ที่สังเคราะห์ผิดพลาดหรือตรวจสอบความถูกต้องได้ (proofreading)
5 -5 ชั่วFดมง หลังจากทำปฏิกิริยาจะได้สาย DNA สายใหม่จำนวนมากที่ถูกกำหนดตามขนาด ของระยะห่างของไพรเมอร์ทั้งสองสายที่จับกับ DNA แม่แบบ จากนั้นนำผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ไปตรวจสอบด้วย agarose gel electrophoresis ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ และ DNA ladder ซึ่งเป็นชิ้นส่วนของ DNA ที่ทราบขนาด ในปัจจุบันเทคนิคพีซีอาร์ใช้กันอย่างแพร่หลายทั้งในด้านการแพทย์ เช่น ใช้ในการตรวจสอบโรค ด้านพันธุวิศวกรรม ใช้ในการเพิ่มปริมาณยีนเพื่อที่จะนำมาศึกษาและการหาลำดับนิวคลีโอไทด์ เอกสารอ้างอิง สถาบันส่งเสริมการสอนวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี. 2548. หนังสือเรียนสาระการเรียนรู้พื้นฐานและเพิ่มเติมชีววิทยา เล่ม 5 กลุ่ม สาระการเรียนรู้ วิทยาศาสตร์ ชั้นมัธยมศึกษาปีที่ 6 หลักสูตร การศึกษาขั้นพื้นฐาน พุทธศักราช 2544. 255 หน้า ประดิษฐ์ พงศ์ทองคำ. 2543. พันธุศาสตร์. สำนักพิมพ์มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. กรุงเทพฯ. 398 หน้า Leland H. Hartwell, et. al. 2000. Genetics From Genes to Genomes. The McGraw-Hill Companies, United State of Amarica. 820 p Robert H. Tamarin. 2002. Principles of Genetics 7th. The McGraw-Hill Companies, United State of Amarica. 684 p Polymerase Chain Reaction – Xeroxing DNA (1992).
Reverse complement •Reverse: change nt. sequence from (5'3') to (3'5') •Complement with the reversed sequence •ทิศทางของสายเหมือนเดิม เปลี่ยนแค่ลาดับ sequence •กระทาที่ sequence ในแต่ละสายเท่านั้น (ทิศการอ่านคงเดิม) 5'CTCCAAGCTCCAAGCTCCAG 3' Reverse: 5'GACCTCGAACCTCGAACCTC 3' Complement: 5'CTGGAGCTTGGAGCTTGGAG 3' ดังนั้นสาย reverse complement ที่ได้คือ:……………………………….. Courier New เป็น font ที่เหมาะในการพิมพ์ sequence ที่สุด 11. How to design primers 1. Manual design - นา sequence มาเลือกตาแหน่งเอง - นายีนที่สนใจทั้งหมดมา alignment เลือกตาแหน่งที่ conserve ( Universal primers) - จากนั้นจึงนาเข้าโปรแกรมตรวจสอบลักษณะของ primers เช่น ความยาว, %GC, Tm, specificity to DNA target, etc. - จะเหมาะในงาน multiplex PCR หรือการออกแบบ probe ในงาน บางอย่าง 12. Multiple sequence alignment for primers and probe design 13. Universal primers for PCR assay 14. How to design primers (II) 1. Program design - ใช้โปรแกรมช่วยออกแบบ primers ต่างๆ - สะดวก รวดเร็ว ประหยัดเวลา สามารถตั้งค่าต่างๆ ได้มาก - ไม่เหมาะในการออกแบบ primers ที่ทา multiplex PCR - ปัจจุบันมี program ช่วยออกแบบ probe for qPCR - ไม่สามารถออกแบบ primers ที่มีการ modified ที่ปลาย 5' ได้ 15.
ศ. 1993 จากการค้นพบเทคนิคพีซีอาร์นี้ หากสนใจประวัติของเค้าก็เข้าที่เวบไซต์ต่อไปนี้ได้เลยค่ะ เราจะต้องอาศัยสิ่งใดบ้างจึงจะสามารถสร้าง DNA ได้? การทำพีซีอาร์อาศัยสิ่งต่อไปนี้ในการทำปฏิกิริยา อย่างแรก... ที่ขาดไม่ได้คือชิ้นส่วนของ DNA ที่เราต้องการจำลองนั่นเองคะ เรียกว่า DNA แม่แบบ (DNA Template)ซึ่งข้อดีของเทคนิคพีซีอาร์นี้คือใช้ตัวอย่าง DNA ที่สกัดจากตัวอย่าง เช่น เลือด เนื้อเยื่อ เพียงเล็กน้อย (ประมาณ 5 ไมดครลิตร) ก็สามารถนำมาเพิ่มจำนวนได้มากมายแล้ว ส่วนต่อมา … ที่จำเป็นในการสังเคราะห์ DNA คือ เอนไซม์ DNA polymerase ซึ่งจะใช้ชนิดพิเศษ ที่สามารถทนความร้อนได้สูง นั่นคือ Taq polymerase โดยสกัดมาจากแบคทีเรีย ( Thermus aquaticus) ที่สามารถทนความร้อนได้ดีและอาศัยในน้ำพุร้อน ทำไมจึงต้องเลือกใช้เอนไซม์ที่สามารถทนความร้อนสูง ๆ ได้ด้วยนะ?
จากนั้นกด Pick Primers 30. โปรแกรมบอกรายละเอียดของ primers เช่น Tm, %GC ข้อมูล secondary structure, product size 31. ให้ข้อมูลตาแหน่ง ของ primers บน sequence ที่เรานามาออกแบบ ข้อมูล primers อื่นๆ ประกอบการพิจารณา ของผู้ใช้งาน 32. ถ้าต้องการ primers ชุดไหน ก็กด Send to Primer3 Manager ได้เลย ต้องการ Blast กับ GenBank (แต่เป็นการ blast ทีละเส้น) 33. ถ้าต้องการ check การจับกันของคู่ primers ว่าจาเพาะกับยีนที่ต้องการหรือไม่ สามารถ copy sequences ไปที่ Primer-BLAST ได้ (แต่อาจใช้เวลานาน) ใส่ตรงนี้ จะใส่หรือไม่ก็ได้ (organism) จากนั้นกด Get Primers 34. ถ้าต้องการ check secondary structure เพิ่มเติม Program OligoCalc Primers ที่ได้สามารถ Order ได้เลยไม่ต้อง reverse complement ข้อดี: รวดเร็ว ประหยัดเวลา ข้อเสีย: Blast primer ได้ทีละเส้นเท่านั้น ถ้าจะดูการจับของ primers ต้องใช้ อีกโปรแกรมหนึ่งช่วย 35. Tips for consideration •Program for primer design tool for prediction of primers •ผลการออกแบบ primers อาจใช้ไม่ได้ 100% ในการทางานจริง •Primers คู่แรกมักเป็น primers ที่ดีที่สุดที่โปรแกรมเลือกให้ •Program for primer design เป็นเหมือนเข็มทิศ และ tool ที่ อานวยความสะดวก และ ลดระยะเวลาการทางานเท่านั้น •ต้องมีการ Optimization PCR ในการทางานจริงเสมอ!
KEY: สถานการณ์ในวันนี้ ยอดผู้ติดเชื้อขยับเพิ่มสูงขึ้นอีกครั้งทั้ง PCR และ ATK PCR +28, 379 ราย ส่วน ATK +22, 331 ราย รวมทั้งสองส่วนอยู่ที่ 50, 710 ราย ยอดผู้ป่วยจากการตรวจด้วย PCR ทำสถิติสูงที่สุดนับตั้งแต่มีการระบาดเป็นวันที่ 2 ติดต่อกัน ผู้ป่วยอาการหนัก-ใช้ท่อช่วยหายใจเพิ่มสูงขึ้น ยอดผู้เสียชีวิตจากโควิด-19 สูงที่สุดในรอบ 6 เดือน … ศูนย์ข้อมูลโควิด-19 รายงานสถานการณ์การระบาดของโควิด-19 ในประเทศไทยประจำวันนี้ ( 1 เม. ย.
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส หรือ PCR เป็นเทคนิคในการทำสำเนาหลายชุดของบริเวณ DNA จำเพาะ ในหลอดทดลอง (ในหลอดทดลองแทนที่จะเป็นสิ่งมีชีวิต) ใน PCR ปฏิกิริยาจะถูกหมุนเวียนซ้ำๆ ผ่านการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิหลายชุด ซึ่งทำให้สามารถผลิตสำเนาของพื้นที่เป้าหมายได้จำนวนมาก ในทำนองเดียวกัน วัฏจักร PCR หมายถึงอะไร? ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส หรือ PCR เป็นเทคนิคในห้องปฏิบัติการที่ใช้ทำสำเนา DNA หลายส่วน หลังจากการสังเคราะห์และเมื่อสิ้นสุด วัฏจักร แรก โมเลกุลดีเอ็นเอที่มีสายคู่แต่ละโมเลกุลประกอบด้วยสายดีเอ็นเอใหม่และสายเก่าหนึ่งสาย รู้ยัง สามขั้นตอนหลักในกระบวนการ PCR คืออะไร? PCR อยู่บนพื้นฐานของสามขั้นตอนง่ายๆ ที่จำเป็นสำหรับปฏิกิริยา การสังเคราะห์ DNA: (1) การเปลี่ยนสภาพของแม่แบบเป็นเส้นเดียว; (2) การหลอม ไพรเมอร์ของเส้นใยเดิมแต่ละเส้นเพื่อ การสังเคราะห์ เส้นใยใหม่ และ (3) การขยายสาย DNA ใหม่จากไพรเมอร์ เมื่อพิจารณาตามนี้แล้ว PCR 4 ขั้นตอนมีอะไรบ้าง? ขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสในลำดับดีเอ็นเอ ขั้นตอนที่ 1: การเปลี่ยนสภาพด้วยความร้อน: โดยปกติความร้อนจะมากกว่า 90 องศาเซลเซียสที่แยก DNA ที่มีเกลียวคู่ออกเป็นสองสายเดี่ยว ขั้นตอนที่ 2: การอบสีรองพื้นให้เข้ากับลำดับเป้าหมาย: ขั้นตอนที่ 3: ส่วนขยาย: ขั้นตอนที่ 4: สิ้นสุดรอบ PGR แรก: วงจร PCR ใช้เวลานานเท่าใด?
สั่ง ซื้อ ของ โลตัส, 2024